基于TLRs信號(hào)通路的調(diào)衡防控分子機(jī)制研究

部分預(yù)針刺不同配穴對(duì)SGU大鼠模型胃組織的影響
1預(yù)針刺不同配穴對(duì)SGU大鼠胃黏膜的形態(tài)學(xué)影響2
1.1實(shí)驗(yàn)材料2
1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組2
1.1.2主要儀器及試劑2
1.2實(shí)驗(yàn)方法3
1.2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及干預(yù)方法3
1.2.2造模方法4
1.2.3觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法5
1.2.4統(tǒng)計(jì)分析6
1.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果7
1.3.1各組大鼠胃組織大體形態(tài)比較7
1.3.2各組大鼠胃潰瘍組織形態(tài)學(xué)比較7
1.4小結(jié)8
1.5討論9
1.5.1胃潰瘍的現(xiàn)代及中醫(yī)的認(rèn)識(shí)9
1.5.2水浸束縛應(yīng)激性胃潰瘍動(dòng)物模型的發(fā)展變化24
1.5.3論合募配穴和俞募配穴25
1.5.4合募配穴和俞募配穴防治應(yīng)激性胃潰瘍的效應(yīng)
規(guī)律分析26
2預(yù)針刺不同配穴對(duì)SGU大鼠血清及胃組織氧化因子及炎性因子的
影響28
2.1實(shí)驗(yàn)材料28
2.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組28
2.1.2主要儀器與試劑28
2.2實(shí)驗(yàn)方法29
2.2.1TBA法測(cè)定血清SOD水平29
2.2.2TBA法測(cè)定血清MDA水平29
2.2.3比色法測(cè)定血清及胃組織MPO水平29
2.2.4硝酸還原酶法測(cè)定血清及胃組織NO水平29
2.2.5比色法測(cè)定胃組織GSH-Px水平30
2.2.6ELISA法檢測(cè)血清IL-1β #65380;TNF-α和IL-6 #65380;ET-1水平30
2.2.7統(tǒng)計(jì)分析30
2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果30
2.3.1各組大鼠胃組織中氧化-抗氧化因子的水平30
2.3.2各組大鼠血清中氧化-抗氧化因子的水平31
2.3.3各組大鼠血清中炎癥細(xì)胞因子的含量31
2.4小結(jié)32
2.5討論33
2.5.1氧化-抗氧化因子系統(tǒng)對(duì)黏膜組織的影響33
2.5.2炎癥細(xì)胞因子對(duì)黏膜組織的影響35
2.5.3針刺對(duì)氧化應(yīng)激的影響研究概況及發(fā)展趨勢(shì)35
3預(yù)針刺不同配穴對(duì)SGU大鼠胃組織TLRs信號(hào)通路的影響38
3.1實(shí)驗(yàn)材料38
3.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組38
3.1.2主要儀器與試劑38
3.2實(shí)驗(yàn)方法40
3.2.1干預(yù)方法40
3.2.2造模方法40
3.2.3免疫組化染色法觀察胃組織TLR4 #65380;MyD88 #65380;TRIF蛋白
表達(dá)情況40
3.2.4Westen
lot法檢測(cè)胃組織中TLR4 #65380;MyD88 #65380;IκB-α
蛋白的表達(dá)41
3.2.5統(tǒng)計(jì)分析41
3.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果42
3.3.1各組大鼠胃組織的TLR4 #65380;MyD88 #65380;TRIF免疫組化結(jié)果42
3.3.2各組大鼠胃組織的TLR4 #65380;MyD88 #65380;IκB-α蛋白免疫印跡結(jié)果43
3.4小結(jié)44
3.5討論45
3.5.1TLRs信號(hào)通路對(duì)黏膜組織的影響45
3.5.2針刺對(duì)TLRs信號(hào)通路的影響46
3.5.3炎癥 #65380;氧化應(yīng)激與TLRs信號(hào)通路的關(guān)系49
3.5.4TLRs信號(hào)通路對(duì)“氧化-抗氧化”平衡的影響49
3.5.5不同配穴針刺治療胃潰瘍機(jī)制的研究進(jìn)展54
3.5.6預(yù)針刺對(duì)保護(hù)黏膜組織的“調(diào)衡防控”分子機(jī)制59
3.5.7不同配穴組方與功效的探討60
第2部分預(yù)針刺不同配穴對(duì)SGU大鼠大腸組織TLRs信號(hào)通路mRNA的影響
4預(yù)針刺不同配穴對(duì)SGU大鼠大腸組織TLRs信號(hào)通路mRNA的影響64
4.1實(shí)驗(yàn)材料64
4.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組64
4.1.2主要儀器及試劑64
4.2實(shí)驗(yàn)方法65
4.2.1干預(yù)方法65
4.2.2造模方法65
4.2.3樣本采集與大腸組織RNA提取65
4.2.4總RNA質(zhì)量檢測(cè)66
4.2.5分析純化mRNA及片段化66
4.2.6合成 鏈cDNA66
4.2.7合成第二鏈cDNA66
4.2.8雙鏈cDNA末端修復(fù)反應(yīng)66
4.2.93′末端加“A”反應(yīng)67
4.2.10連接測(cè)序接頭67
4.2.11文庫(kù)片段篩選67
4.2.12PCR擴(kuò)增DNA文庫(kù)67
4.2.13文庫(kù)的質(zhì)量檢測(cè)67
4.2.14上機(jī)測(cè)序68
4.3實(shí)驗(yàn)過(guò)程68
4.3.1采用FastQC測(cè)序數(shù)據(jù),對(duì)原始數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估68
4.3.2采用Timgaloe測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量控制68
4.3.3采用HISAT2參考基因組比對(duì)68
4.3.4采用Rseqc對(duì)轉(zhuǎn)錄組整體質(zhì)量評(píng)估68
4.3.5采用StingTie進(jìn)行基因表達(dá)定量69
4.3.6采用deseq2進(jìn)行差異基因鑒定69
4.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果70
4.4.1mRNA質(zhì)量質(zhì)控結(jié)果70
4.4.2mRNA數(shù)據(jù)質(zhì)控結(jié)果71
4.4.3各組mRNA差異表達(dá)比較72
4.4.4各組樣品TLRs信號(hào)通路差異基因的GO富集比較73
4.4.5各組樣品TLRs信號(hào)通路差異基因的KEGG富集分析74
4.5小結(jié)75
4.6討論76
4.6.1胃和大腸在消化系統(tǒng)胚胎發(fā)育上是同源的76
4.6.2胃和大腸在中醫(yī)臟腑關(guān)系中聯(lián)系緊密76
4.6.3合募配穴組與俞募配穴組對(duì)應(yīng)激性胃潰瘍大鼠黏膜的保護(hù)的共同基因77
4.6.4合募配穴組對(duì)應(yīng)激性胃潰瘍大鼠黏膜的保護(hù)作用的基因77
4.6.5俞募配穴組對(duì)應(yīng)激性胃潰瘍大鼠黏膜的保護(hù)作用的基因77
第3部分預(yù)針刺與奧美拉唑?qū)GU模型大鼠胃組織保護(hù)作用研究
5預(yù)針刺合募配穴預(yù)防應(yīng)激性胃潰瘍模型大鼠胃組織保護(hù)作用的機(jī)制研究82
5.1實(shí)驗(yàn)材料82
5.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組82
5.1.2主要儀器及試劑82
5.2實(shí)驗(yàn)方法83
5.2.1大鼠SGU模型的建立83
5.2.2干預(yù)方法83
5.2.3檢測(cè)指標(biāo)及方法84
5.2.4統(tǒng)計(jì)分析85
5.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果85
5.3.1各組大鼠胃組織肉眼形態(tài)比較85
5.3.2各組大鼠胃黏膜組織形態(tài)學(xué)比較85
5.3.3各組大鼠血清中MDA #65380;MPO #65380;GSH-Px水平比較87
5.3.4各組大鼠胃組織中MDA #65380;MPO #65380;GSH-Px水平比較88
5.3.5各組大鼠血清中炎性因子含量比較89
5.3.6各組大鼠胃組織中TLR4 #65380;MyD88 #65380;IκB-α蛋白表達(dá)比較89
5.4小結(jié)90
5.5討論90
6預(yù)針刺俞募配穴對(duì)應(yīng)激性胃潰瘍模型大鼠胃組織保護(hù)作用的機(jī)制研究92
6.1實(shí)驗(yàn)材料92
6.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物92
6.1.2動(dòng)物分組及處理92
6.2實(shí)驗(yàn)方法93
6.2.1束縛-水浸法應(yīng)激性胃潰瘍模型制備93
6.2.2樣本采集與胃潰瘍指數(shù)測(cè)定93
6.2.3血清細(xì)胞因子測(cè)定94
6.2.4組織細(xì)胞因子測(cè)定94
6.2.5ELISA實(shí)驗(yàn)評(píng)估94
6.2.6組織學(xué)觀察94
6.2.7免疫印跡實(shí)驗(yàn)95
6.2.8統(tǒng)計(jì)分析95
6.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果95
6.3.1俞募配穴對(duì)大鼠模型胃黏膜肉眼觀及潰瘍指數(shù)變化95
6.3.2俞募配穴降低胃的UI指數(shù)情況96
6.3.3俞募配穴對(duì)模型大鼠組織形態(tài)學(xué)的影響96
6.3.4俞募配穴降低血清和胃組織中過(guò)氧化物的水平97
6.3.5俞募配穴可降低血清炎癥因子的表達(dá)99
6.3.6俞募配穴對(duì)TLR4 #65380;MyD88和NF-κBp65蛋白表達(dá)的抑制作用99
6.4小結(jié)100
6.5討論100
6.5.1研究結(jié)果100
6.5.2預(yù)針刺俞募配穴對(duì)胃黏膜的“調(diào)衡防控”機(jī)制102
第4部分腹部推拿對(duì)應(yīng)激性胃潰瘍的保護(hù)作用研究
7腹部推拿對(duì)應(yīng)激性胃潰瘍的保護(hù)作用研究106
7.1實(shí)驗(yàn)材料106
7.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組106
7.1.2主要儀器及試劑106
7.2實(shí)驗(yàn)方法106
7.2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及干預(yù)方法106
7.2.2造模方法107
7.2.3統(tǒng)計(jì)分析107
7.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果107
7.3.1腹部推拿對(duì)預(yù)防SGU各組大鼠胃組織損傷有作用107
7.3.2腹部推拿預(yù)防SGU胃組織損傷可能通過(guò)調(diào)節(jié)“氧化-
抗氧化”平衡108
7.4討論111
7.4.1“經(jīng)絡(luò)聯(lián)系至心腦”是腹部推拿起到“調(diào)神”作用的
前提111
7.4.2“調(diào)理臟腑”是腹部推拿起到“調(diào)神”的基礎(chǔ)112
7.4.3腹部推拿可通過(guò)“暢通氣機(jī)”而達(dá)到“調(diào)神”的目的112
參考文獻(xiàn)
附錄