生物工程實(shí)驗(yàn)指南

目 錄
**篇 實(shí) 驗(yàn) 部 分
實(shí)驗(yàn)一 磷脂的分離純化3
實(shí)驗(yàn)1-1 卵磷脂的提取3
實(shí)驗(yàn)1-2 薄層層析法檢測(cè)卵磷脂5
實(shí)驗(yàn)二 紅霉素的提取分離及效價(jià)測(cè)定9
實(shí)驗(yàn)2-1 有機(jī)溶劑萃取法制備硫氰酸紅霉素9
實(shí)驗(yàn)2-2 大網(wǎng)格樹(shù)脂吸附法提取紅霉素12
實(shí)驗(yàn)2-3 無(wú)機(jī)鹽對(duì)再生型雙水相體系萃取紅霉素分配系數(shù)的影響15
實(shí)驗(yàn)2-4 比色法測(cè)定紅霉素效價(jià)18
實(shí)驗(yàn)三 木姜葉柯黃酮的提取及測(cè)定22
實(shí)驗(yàn)3-1 超聲波輔助法提取木姜葉柯黃酮22
實(shí)驗(yàn)3-2 乙醇回流法提取木姜葉柯黃酮24
實(shí)驗(yàn)3-3 微波輔助法提取木姜葉柯黃酮26
實(shí)驗(yàn)3-4 木姜葉柯黃酮的含量測(cè)定29
實(shí)驗(yàn)四 超臨界法萃取青蒿素及純度測(cè)定32
實(shí)驗(yàn)4-1 利用超臨界CO2 流體萃取青蒿素32
實(shí)驗(yàn)4-2 HPLC 法測(cè)定青蒿素純度35
實(shí)驗(yàn)五 番茄紅素的提取分離及含量測(cè)定38
實(shí)驗(yàn)5-1 蔬菜中番茄紅素的提取分離38
實(shí)驗(yàn)5-2 分光光度法測(cè)定番茄紅素的含量40
實(shí)驗(yàn)六 咖啡因的提取分離及測(cè)定43
實(shí)驗(yàn)6-1 乙醇萃取法提取分離咖啡因43
實(shí)驗(yàn)6-2 HPLC 法檢測(cè)咖啡因含量45
實(shí)驗(yàn)七 微生物的分離純化和鑒定48
實(shí)驗(yàn)7-1 從土壤中分離和純化微生物48
實(shí)驗(yàn)7-2 利用細(xì)菌16S rDNA 序列分析鑒定其屬51
實(shí)驗(yàn)7-3 細(xì)菌的生理生化反應(yīng)56
實(shí)驗(yàn)7-4 細(xì)菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定59
實(shí)驗(yàn)7-5 真菌ITS 序列分析鑒定61
實(shí)驗(yàn)八 環(huán)境因素對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響65
實(shí)驗(yàn)九 小鼠TLR2 基因的克隆68
實(shí)驗(yàn)9-1 小鼠肝臟總RNA 提取68
實(shí)驗(yàn)9-2 RT-PCR、擴(kuò)增產(chǎn)物純化與瓊脂糖凝膠電泳鑒定71
實(shí)驗(yàn)9-3 RT-PCR 產(chǎn)物克隆75
實(shí)驗(yàn)9-4 轉(zhuǎn)化子的篩選及PCR 鑒定77
實(shí)驗(yàn)9-5 重組質(zhì)粒提取與酶切鑒定80
實(shí)驗(yàn)十 AFLP 分子標(biāo)記實(shí)驗(yàn)技術(shù)84
實(shí)驗(yàn)10-1 基因組DNA 的制備、酶切及接頭連接84
實(shí)驗(yàn)10-2 PCR 擴(kuò)增及產(chǎn)物電泳鑒定87
實(shí)驗(yàn)十一 酸性磷酸酯酶的特性分析93
實(shí)驗(yàn)11-1 酶促反應(yīng)進(jìn)程曲線的制作和酶活力測(cè)定93
實(shí)驗(yàn)11-2 酸性磷酸酯酶的Km 和Vmax 測(cè)定98
實(shí)驗(yàn)11-3 離子交換層析法純化酸性磷酸酯酶101
實(shí)驗(yàn)11-4 SDS-PAGE 測(cè)酸性磷酸酯酶的相對(duì)分子質(zhì)量105
實(shí)驗(yàn)十二 酵母蔗糖酶的提取與活性功能基團(tuán)的化學(xué)修飾 111
實(shí)驗(yàn)12-1 酵母蔗糖酶的提取、分離與純化 111
實(shí)驗(yàn)12-2 酵母蔗糖酶的包埋及固定化酶活性測(cè)定114
實(shí)驗(yàn)12-3 酵母蔗糖酶活性功能基團(tuán)的化學(xué)修飾117
實(shí)驗(yàn)十三 產(chǎn)纖維素酶微生物篩選、產(chǎn)酶條件優(yōu)化、纖維素酶基因的克隆分析119
實(shí)驗(yàn)13-1 產(chǎn)纖維素酶微生物的分離與初步鑒定120
實(shí)驗(yàn)13-2 產(chǎn)纖維素酶菌種的篩選與保藏122
實(shí)驗(yàn)13-3 酶活測(cè)定與傳代保藏124
實(shí)驗(yàn)13-4 產(chǎn)纖維素酶菌種的紫外誘變育種127
實(shí)驗(yàn)13-5 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化產(chǎn)纖維素酶菌種的產(chǎn)酶條件129
實(shí)驗(yàn)13-6 產(chǎn)纖維素酶細(xì)菌菌株酶基因克隆分析133
實(shí)驗(yàn)十四 酶的固定化、酶?jìng)鞲衅鳌⒚阜磻?yīng)器及其應(yīng)用137
實(shí)驗(yàn)14-1 酶的固定化及酶?jìng)鞲衅鞯闹苽浼皯?yīng)用137
實(shí)驗(yàn)14-2 酶反應(yīng)器設(shè)計(jì)及酪蛋白水解物的制備139
實(shí)驗(yàn)14-3 酶法澄清蘋(píng)果果汁加工工藝優(yōu)化142
實(shí)驗(yàn)十五 多克隆抗體的純化與檢測(cè)145
實(shí)驗(yàn)15-1 兔血清的分離145
實(shí)驗(yàn)15-2 多克隆抗體的硫酸銨分級(jí)粗純化148
實(shí)驗(yàn)15-3 抗體的蛋白質(zhì)G 親和純化150
實(shí)驗(yàn)十六 利用畢赤酵母制備重組蛋白154
實(shí)驗(yàn)16-1 酵母轉(zhuǎn)化子的活化及少量培養(yǎng)154
實(shí)驗(yàn)16-2 重組茯苓免疫調(diào)節(jié)蛋白的鎳親和純化156
實(shí)驗(yàn)16-3 重組茯苓免疫調(diào)節(jié)蛋白的DEAE 離子交換純化158
實(shí)驗(yàn)十七 外源基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)162
實(shí)驗(yàn)17-1 脂質(zhì)體介導(dǎo)的外源基因細(xì)胞轉(zhuǎn)染162
實(shí)驗(yàn)17-2 蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)外源基因在細(xì)胞中的表達(dá)164
實(shí)驗(yàn)十八 基于細(xì)胞水平的藥物篩選169
實(shí)驗(yàn)18-1 MTT 法檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞活力的影響169
實(shí)驗(yàn)18-2 平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞增殖的影響171
實(shí)驗(yàn)18-3 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞遷移的影響173
實(shí)驗(yàn)十九 淀粉質(zhì)原料乙醇發(fā)酵175
實(shí)驗(yàn)19-1 淀粉質(zhì)原料乙醇搖瓶發(fā)酵175
實(shí)驗(yàn)19-2 乙醇的蒸餾178
實(shí)驗(yàn)19-3 發(fā)酵液中乙醇含量的檢測(cè)181
實(shí)驗(yàn)二十 檸檬酸發(fā)酵184
實(shí)驗(yàn)20-1 檸檬酸搖瓶發(fā)酵185
實(shí)驗(yàn)20-2 檸檬酸的提取——檸檬酸鈣的制備187
實(shí)驗(yàn)20-3 檸檬酸的檢測(cè)189
實(shí)驗(yàn)二十一 α-淀粉酶發(fā)酵193
實(shí)驗(yàn)21-1 α-淀粉酶搖瓶發(fā)酵193
實(shí)驗(yàn)21-2 α-淀粉酶活力測(cè)定195
實(shí)驗(yàn)二十二 青霉素發(fā)酵200
實(shí)驗(yàn)22-1 青霉素?fù)u瓶發(fā)酵200
實(shí)驗(yàn)22-2 抗生素效價(jià)評(píng)定203
實(shí)驗(yàn)二十三 茯苓多糖發(fā)酵及檢測(cè)205
實(shí)驗(yàn)23-1 茯苓多糖搖瓶發(fā)酵205
實(shí)驗(yàn)23-2 茯苓多糖的提取208
實(shí)驗(yàn)23-3 硫酸-苯酚法測(cè)定茯苓多糖210
實(shí)驗(yàn)二十四 植物組織培養(yǎng)213
實(shí)驗(yàn)24-1 MS 培養(yǎng)基母液和培養(yǎng)基的配制213
實(shí)驗(yàn)24-2 外植體滅菌、接種與培養(yǎng)218
實(shí)驗(yàn)24-3 繼代培養(yǎng)221
實(shí)驗(yàn)24-4 愈傷組織再分化芽的培養(yǎng)223
實(shí)驗(yàn)24-5 生根培養(yǎng)225
實(shí)驗(yàn)24-6 試管苗的馴化與移栽230
實(shí)驗(yàn)24-7 植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)233
第二篇 實(shí) 訓(xùn) 部 分
實(shí)訓(xùn)一 機(jī)械攪拌式發(fā)酵罐綜合實(shí)訓(xùn)239
實(shí)訓(xùn)1-1 發(fā)酵罐結(jié)構(gòu)的認(rèn)知239
實(shí)訓(xùn)1-2 發(fā)酵罐的滅菌240
實(shí)訓(xùn)二 物料的粗粉碎與超微細(xì)粉碎243
實(shí)訓(xùn)2-1 粗粉碎243
實(shí)訓(xùn)2-2 超微細(xì)粉碎244
實(shí)訓(xùn)三 產(chǎn)物分離精制綜合實(shí)訓(xùn)246
實(shí)訓(xùn)3-1 高速管式離心機(jī)246
實(shí)訓(xùn)3-2 降膜式蒸發(fā)器247
實(shí)訓(xùn)3-3 噴霧干燥249
主要參考文獻(xiàn)251
附錄1 常用單位換算表253
附錄2 常用AFLP 選擇性擴(kuò)增引物254
附錄3 幾種植物外植體培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方255
附錄4 過(guò)濾除菌法258
附錄5 生物工程常用試劑的配制260
附錄6 常用培養(yǎng)基的配制271