SNX13與心力衰竭的關(guān)系及其機(jī)制研究（精）

總序
論叢前言
前言
英語縮寫一覽表
第1章 引言
1．1 概述
1．2 Sorting nexins家族與人類疾病
1．2．1 內(nèi)小體
1．2．2 PX結(jié)構(gòu)域
l．2．3 Sorting nexins家族
1．2．4 Sorting nexins家族與人類疾病
1．2．5 本章小結(jié)
第2章 SNX13與心力衰竭的關(guān)系
2．1 材料和儀器
2．1．1 臨床病例標(biāo)本
2．1．2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
2．1．3 主要試劑
2．1．4 主要儀器
2．1．5 PCR引物序列
2．2 實(shí)驗(yàn)方法
2．2．1 組織RNA提取
2．2．2 RNA逆轉(zhuǎn)錄
2．2．3 定量PCR
2．2．4 小鼠心衰模型的建立
2．2．5 小動(dòng)物心臟超聲
2．2．6 Western Blot免疫印跡
2．2．7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2．3 結(jié)果
2．3．1 人心力衰竭心肌組織中SNX13的mRNA水平顯著下調(diào)
2．3．2 人心力衰竭心肌組織中SNX13的蛋白水平顯著下調(diào)
2．3．3 TAC小鼠心肌組織中SNX13的表達(dá)水平顯著下調(diào)
2．4 討論
第3章 SNX13敲除引起心力衰竭的病理生理機(jī)制
3．1 材料和儀器
3．1．1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
3．1．2 主要試劑
3．1．3 主要儀器
3．2 實(shí)驗(yàn)方法
3．2．1 信息學(xué)預(yù)測(cè)
3．2．2 分離成年斑馬魚各器官組織
3．2．3 斑馬魚胚胎整體原位雜交
3．2．4 斑馬魚Morpholino顯微注射
3．2．5 斑馬魚胚胎western blot
3．2．6 斑馬魚胚胎mRNA分析
3．2．7 斑馬魚胚胎HE染色
3．2．8 共聚焦顯微鏡記錄心功能
3．2．9 電子顯微鏡成像
3．2．10 吖啶橙染色
3．2．11 Caspase 3免疫組化熒光染色
3．2．12 新生大鼠心肌細(xì)胞分離與轉(zhuǎn)染
3．2．13 心肌細(xì)胞RNA分析
3．2．14 心肌細(xì)胞western blot
3．2．15 DNA ladder實(shí)驗(yàn)
3．2．16 病毒載體構(gòu)建與感染
3．2．17 流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡
3．2．18 線粒體組分分離
3．2．19 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3．3 結(jié)果
3．3．1 斑馬魚SNX13敲除后出現(xiàn)心臟功能異常
3．3．2 斑馬魚SNX13敲除后的心肌組織出現(xiàn)自噬現(xiàn)象和凋亡
3．3．3 SNX13敲除的新生大鼠心肌細(xì)胞發(fā)生凋亡
3．3．4 SNX13敲除后誘發(fā)外源性凋亡途徑
3．4 討論
3．4．1 SNX13敲除模式動(dòng)物的建立
3．4．2 SNX13敲除的斑馬魚發(fā)生了心衰
3．4．3 SNX13敲除致心肌細(xì)胞凋亡
3．4．4 SNX13敲除誘發(fā)細(xì)胞外源性凋亡途徑
第4章 SNX13介導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡的機(jī)制
4．1 材料和儀器
4．1．1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
4．1．2 主要試劑
4．1．3 主要儀器
4．2 實(shí)驗(yàn)方法
4．2．1 組織／細(xì)胞Western blot
4．2．2 新生大鼠心肌細(xì)胞分離與轉(zhuǎn)染
4．2．3 心肌細(xì)胞RNA分析
4．2．4 蛋白酶活性檢測(cè)
4．2．5 病毒載體構(gòu)建與轉(zhuǎn)染
4．2．6 流式細(xì)胞儀凋亡檢測(cè)
4．2．7 mRNA體外轉(zhuǎn)錄
4．2．8 顯微注射
4．2．9 免疫共沉淀（CO-IP）
4．2．10 細(xì)胞免疫熒光染色
4．2．11 早期內(nèi)小體組分分離
4．2．12 H9C2細(xì)胞培養(yǎng)
4．2．13 缺失突變體構(gòu)建
4．2．14 細(xì)胞cAMP檢測(cè)
4．2．15 熒光能量共振轉(zhuǎn)移（FRET）
4．2．16 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
4．3 結(jié)果
4．3．1 SNX13敲除會(huì)下調(diào)心肌特異性抗凋亡分子ARC蛋白的表達(dá)
4．3．2 SNX13敲除加速了ARC蛋白的溶酶體降解途徑
4．3．3 SNX13缺失引起的凋亡和心力衰竭緣于ARC蛋白水平的下調(diào)
4．3．4 SNX13通過內(nèi)小體系統(tǒng)調(diào)控ARC的胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)
4．3．5 SNX13通過PXA結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)ARC的胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)
4．4 討論
4．4．1 SNX13敲除致ARC表達(dá)下調(diào)
4．4．2 SNX13敲除后ARC的溶酶體途徑降解
4．4．3 SNX13敲除后凋亡和心力衰竭的機(jī)制是ARC的下調(diào)
4．4．4 SNX13調(diào)控ARC的轉(zhuǎn)位
4．4．5 SNX13通過PXA結(jié)構(gòu)域與ARC作用
第5章 結(jié)論與展望
5．1 結(jié)論
5．2 進(jìn)一步工作
參考文獻(xiàn)
后記