生物工程專業(yè)實驗

第1篇生物工程實驗技術(shù)原理/1
第1章生物化學(xué)實驗基本理論1
1.1電泳技術(shù)1
1.2PCR技術(shù)2
1.3生物分子濃度的測定3
1.4蛋白質(zhì)的分離純化3

第2章微生物學(xué)實驗基本理論4
2.1微生物學(xué)實驗的意義4
2.2微生物的顯微觀察及染色原理4
2.3微生物的純培養(yǎng)7
2.4微生物的生理生化鑒定9
2.5PCR技術(shù)在微生物鑒定上的應(yīng)用9
2.6菌種的保藏9
2.7微生物的生長繁殖10

第3章重組DNA技術(shù)及工程細(xì)胞構(gòu)建11
3.1目的基因的獲取11
3.2DNA片段與載體的連接（以質(zhì)粒載體為例）12
3.3重組基因?qū)胧荏w細(xì)胞12
3.4篩選含有目的基因的受體細(xì)胞13

第4章發(fā)酵工程實驗原理14
4.1發(fā)酵的基本內(nèi)容14
4.2發(fā)酵過程的組成14
4.3發(fā)酵罐的類型15
4.4發(fā)酵罐及培養(yǎng)基的滅菌15
4.5發(fā)酵培養(yǎng)基的配制17
4.6發(fā)酵過程的控制17

第5章常用生物分離實驗技術(shù)及原理18
5.1細(xì)胞破碎18
5.2過濾和離心18
5.3沉淀18
5.4萃取19
5.5膜分離20
5.6色譜20

第6章生物反應(yīng)工程實驗原理22
6.1酶催化反應(yīng)動力學(xué)22
6.2生物反應(yīng)器中氧的傳遞特性26
6.3生物反應(yīng)器的操作動力學(xué)30
6.4連續(xù)式生物反應(yīng)器的流動模型33

第7章酶工程及生物催化原理34
7.1細(xì)胞固定化概述34
7.2細(xì)胞固定化方法34
7.3生物催化概述35

第2篇實驗部分/36
第8章生物化學(xué)實驗36
實驗8.1常用生物化學(xué)試劑的配制及高壓滅菌36
實驗8.2還原糖的測定——3,5-二硝基水楊酸（DNS）比色法39
實驗8.3基因組DNA的分離提取及電泳檢測41
實驗8.4DNA濃度及純度的測定43
實驗8.5蛋白質(zhì)的SDS-PAGE檢測44
實驗8.6牛乳球蛋白基因的PCR擴(kuò)增及電泳檢測46
實驗8.7HPLC法測定胰島素的氨基酸組成48

第9章微生物學(xué)實驗50
實驗9.1顯微鏡的使用及微生物形態(tài)的觀察50
實驗9.2細(xì)菌的革蘭氏染色法53
實驗9.3細(xì)菌的莢膜染色法56
實驗9.4細(xì)菌的芽孢染色法58
實驗9.5微生物細(xì)胞大小的測定——測微尺的使用60
實驗9.6顯微鏡直接計數(shù)法（血細(xì)胞計數(shù)板法）62
實驗9.7培養(yǎng)基的配制與滅菌64
實驗9.8微生物的純培養(yǎng)69
實驗9.9淀粉水解實驗75
實驗9.10糖酵解實驗77
實驗9.11利用16S rDNA基因序列鑒定細(xì)菌79
實驗9.12菌種的保藏82
實驗9.13空氣中微生物的檢測84
實驗9.14大腸桿菌生長曲線的測定87
實驗9.15土壤中解磷微生物的分離純化及鑒定89

第10章基因工程實驗94
實驗10.1原核生物基因組DNA的提取及電泳檢測94
實驗10.2目的基因PCR擴(kuò)增、檢測和純化97
實驗10.3質(zhì)粒DNA的提取及檢測99
實驗10.4重組質(zhì)粒的構(gòu)建101
實驗10.5感受態(tài)細(xì)胞的制備和轉(zhuǎn)化103
實驗10.6原核生物總RNA提取與逆轉(zhuǎn)錄——聚合酶鏈反應(yīng)106

第11章發(fā)酵工程實驗109
實驗11.1實驗室常用發(fā)酵罐的基本結(jié)構(gòu)與功能109
實驗11.2發(fā)酵液中生物量的測定111
實驗11.3發(fā)酵培養(yǎng)基的制備及發(fā)酵罐滅菌113
實驗11.4發(fā)酵種子制備及發(fā)酵罐接種116
實驗11.5酵母細(xì)胞補(bǔ)料分批發(fā)酵118
實驗11.6利用大腸桿菌E.coli BL21(DE3)（pET28a-hhdhxf2）工程菌表達(dá)鹵醇脫鹵酶121
實驗11.7固態(tài)發(fā)酵法生產(chǎn)檸檬酸125

第12章生物分離工程實驗129
實驗12.1植物細(xì)胞的破碎及超氧化物歧化酶的浸提129
實驗12.2考馬斯亮藍(lán)G250法測定蛋白質(zhì)含量131
實驗12.3聯(lián)大茴香胺鹽酸鹽法測定超氧化物歧化酶活力133
實驗12.4雙水相萃取相圖的制作136
實驗12.5雙水相系統(tǒng)萃取超氧化物歧化酶138
實驗12.6熱激和鹽析法提取超氧化物歧化酶140
實驗12.7纖維素離子交換柱色譜純化超氧化物歧化酶142

第13章生物反應(yīng)工程實驗144
實驗13.1LB法測定堿性磷酸酶的動力學(xué)參數(shù)144
實驗13.2游離堿性磷酸酶與固定化堿性磷酸酶的動力學(xué)參數(shù)比較147
實驗13.3亞硫酸鈉氧化法測定氣液接觸過程的體積傳質(zhì)系數(shù)KLa150
實驗13.4動態(tài)法測定間歇生物反應(yīng)器的溶氧體積傳質(zhì)系數(shù)KLa152
實驗13.5微生物反應(yīng)器的反應(yīng)性能測定155
實驗13.6連續(xù)攪拌槽式反應(yīng)器停留時間分布的測定157

第14章酶工程實驗161
實驗14.1溫度和pH值對β-葡萄糖苷酶活力的影響161
實驗14.2纖維素酶活力的測定及酶水解纖維素164
實驗14.3酶偶聯(lián)法測定葡萄糖激酶的活力166
實驗14.4海藻酸鈉包埋法制備固定化α-淀粉酶168
實驗14.5酵母細(xì)胞固定化及催化前手性苯乙酮不對稱還原合成手性醇170
實驗14.6有機(jī)相中脂肪酶的催化轉(zhuǎn)酯化作用172

第15章設(shè)計性開放實驗174
15.1設(shè)計性開放實驗教學(xué)目標(biāo)174
15.2設(shè)計性開放實驗申請及開出程序174
15.3設(shè)計性開放實驗教學(xué)內(nèi)容和基本要求175
15.4設(shè)計性開放實驗考核方式176
15.5部分設(shè)計性開放實驗項目176

第3篇附錄/177
附錄1生物工程實驗室安全規(guī)則177
附錄2常用緩沖液的配制184
附錄3常用抗生素和酶的配制189
附錄4常用培養(yǎng)基的配制191
附錄5實驗室常用貯存液的配制193
附錄6常用生物質(zhì)理化參數(shù)197

參考文獻(xiàn)200