現(xiàn)代分子生物學實驗

第1章 特定基因的克隆 附1.1 Bad基因介紹 實驗1.1 從核酸數(shù)據(jù)庫中獲得mBad基因編碼序列 實驗1.2 從細胞中提取總RNA 實驗1.3 逆轉(zhuǎn)錄獲得小鼠B16F10細胞的cDNA 實驗1.4 PCR擴增目的基因mBad 附1.2 mBad基因PCR引物的設計 實驗1.5 PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳回收 實驗1.6 SDS堿裂解法提取質(zhì)粒DNA 實驗1.7 用質(zhì)粒DNA小量抽提試劑盒制備質(zhì)粒DNA 附1.3 克隆載體的選擇 實驗1.8 DNA的限制性酶切和酶切產(chǎn)物的回收 附1.4 酶切位點的選擇 實驗1.9 連接 附1.5 平端DNA的連接反應 實驗1.10 轉(zhuǎn)化 實驗1.11 陽性重組子的篩選以及測序驗證第2章 克隆基因的表達和表達產(chǎn)物的純化 實驗2.1 His-tag EGFP在大腸桿茵中的表達和純化 附2.1 融合蛋白表達載體pHis-EGFP的構建及融合蛋白的親和純化結果 實驗2.2 GST-EBFP融合蛋白在大腸桿茵中的表達和純化 附2.2 GST-EBFP的純化結果 實驗2.3 GST-EBFP在巴氏畢赤酵母中的表達 附2.3 pPICZ C-GST-EBFP重組質(zhì)粒的構建、鑒定 實驗2.4 GST-EGFP在昆蟲細胞中的表達純化 附2.4 重組AcNPV-EGFP病毒的構建與篩選第3章 特定基因的功能研究 實驗3.1 用重疊延伸PCR法進行EGFP基因的定點突變 附3.1 重疊延伸PCR法基因定點突變的實驗結果 實驗3.2 用單管大引物PCR法進行EGFP基因的快速定點突變 附3.2 單管大引物PCR法基因定點突變的實驗結果 實驗3.3 mBad基因在293T細胞中的瞬時表達 實驗3.4 western b10tting檢測瞬時轉(zhuǎn)染基因的表達 實驗3.5 人DNMT1基因干擾質(zhì)粒shRNA真核表達載體的構建 附3.3 干擾質(zhì)粒的設計 實驗3.6 質(zhì)粒DNA的大量純化 實驗3.7 脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染哺乳動物細胞MCF-7 附3.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染結果 實驗3.8 實時熒光定量PCR法檢測DNMT1基因mRNA表達水平 附3.5 熒光定量PCR實驗結果 實驗3.9 利用熒光顯微鏡檢測細胞骨架蛋白β-actin在A549細胞中的定位 附3.6 A549細胞中β-actin的熒光顯微鏡照片 實驗3.10 流式細胞儀檢測紫杉醇對A549細胞周期的影響 附3.7 紫杉醇處理對A549細胞周期的影響 實驗3.11 流式細胞儀檢測臍靜脈內(nèi)皮細胞增殖 附3.8 流式細胞儀檢測臍靜脈內(nèi)皮細胞的增殖 實驗3.12 流式細胞儀檢測細胞凋亡 附3.9 流式細胞儀檢測Jurkat淋巴瘤細胞的凋亡第4章 蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用 實驗4.1 酵母雙雜交體系發(fā)現(xiàn)FADD與Fas的相互作用 實驗4.2 二維電泳比較FADD和FADD-/-細胞株的蛋白質(zhì)表達差異 附4.1 SDS-聚丙烯酰胺凝膠的經(jīng)驗配方 附4.2 2DE常見問題與解決辦法 實驗4.3 GST pull-down驗證FADD與Fas的相互作用 附4.3 GST pull-down驗證FADD與Fas相互作用的結果示意圖 實驗4.4 免疫共沉淀分析FADD與Fas相互作用的結構域 附4.4 Fas與FADD不同結構域相互作用的Co-IP結果示意圖 實驗4.5 熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(FRET)分析FADD與Fas相互作用 實驗4.6 利用噬茵體肽庫展示技術篩選與鏈霉親和素特異性結合的氨基酸序列第5章 DNA與蛋白質(zhì)的相互作用 實驗5.1 EMSA分析轉(zhuǎn)錄因子NF-kB與DNA結合序列的結合 實驗5.2 染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)分析NF-kB與TRAF1基因啟動子序列的結合 實驗5.3 報告基因檢測技術分析不同細胞中PSM_A基因的啟動子活性附錄Ⅰ 網(wǎng)絡資源附錄Ⅱ 常用儀器及供應商附錄Ⅲ 著名生物試劑公司及其特色產(chǎn)品附錄Ⅳ 常用溶液配制附錄Ⅴ 常用工具酶附錄Ⅵ 實驗室常用技術參數(shù)資料