遺傳工程概論（第2版）

第一章 引言
一、遺傳工程的概念
二、遺傳工程的發(fā)展概況
三、遺傳工程所需的微生物學(xué)原理
（一）大腸桿菌的一般特性
（二）抗生素抗性
（三）細(xì)菌細(xì)胞的生長(zhǎng)
第二章 遺傳工程的載體
一、質(zhì)粒載體
（一）質(zhì)粒的復(fù)制
1.質(zhì)粒的復(fù)制起始和控制
2.質(zhì)粒的不相容性
（二）質(zhì)粒的改造
（三）目前常用的質(zhì)粒載體
1.帶有多克隆位點(diǎn)的質(zhì)粒
2.帶有噬菌體啟動(dòng)子的質(zhì)粒
3.表達(dá)質(zhì)粒
二、單鏈?zhǔn)删w克隆載體
（一）M13噬菌體
（二）α互補(bǔ)
（三）M13及其寄主的改造
（四）噬菌粒
三、雙鏈?zhǔn)删w克隆載體
（一）入噬菌體的基因組結(jié)構(gòu)與侵染
1.λ噬菌體的生活周期
2.λ噬菌體的基因組結(jié)構(gòu)
3.λ噬菌體的侵染
（二）λ噬菌體載體的構(gòu)建
1.生物學(xué)制約
2.載體的通用性
3.體外包裝
四、粘粒載體
第三章 DNA的提取
一、原核生物染色體DNA的提取
二、原核生物染色體外DNA的分離
三、質(zhì)粒DNA的快速提取
四、真核生物染色體DNA的提取
五、DNA濃度和純度的光學(xué)分析
第四章 遺傳工程的酶學(xué)基礎(chǔ)
一、限制性?xún)?nèi)切酶
（一）寄主的限制和修飾
（二）限制性?xún)?nèi)切酶的類(lèi)別
1.第一類(lèi)限制性?xún)?nèi)切酶
2.第二類(lèi)限制性?xún)?nèi)切酶
3.第三類(lèi)限制性?xún)?nèi)切酶
（三）限制性?xún)?nèi)切酶的純化
（四）限制性?xún)?nèi)切酶反應(yīng)的終止
二、DNA聚合酶
（一）E.coliDNA聚合酶I
（二）E.coliDNA聚合酶I的Klenow片段
（三）T4DNA聚合酶
（四）天然的T7DNA聚合酶
（五）修飾的T7DNA聚合酶
（六）TaqDNA聚合酶和反轉(zhuǎn)錄酶
三、依賴(lài)于DNA的RNA聚合酶
四、DNA及RNA的修飾酶
（一）末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶
（——）T4多核苷酸激酶
（三）堿性磷酸酶
五、核酸酶
（一）DNA酶I
（二）Bal31核酸酶
（三）S1核酸酶
（四）外切核酸酶III
（五）核糖核酸酶H
第五章 凝膠電泳和雜交分析
一、凝膠電泳
（一）基本原理
（二）DNA的可見(jiàn)性
（三）電泳圖譜
（四）凝膠系統(tǒng)
（五）實(shí)驗(yàn)條件對(duì)凝膠電泳的影響
（六）指示染料和加樣緩沖液
（七）DNA分子大小的確定
（八）DNA的回收
二、雜交分析
（一）Southern吸印和雜交分析
（二）Northern吸印和雜交分析
（三）Western印跡檢測(cè)技術(shù)
（四）DNA的斑點(diǎn)雜交
（五）探針的制備
1．缺口平移法
2．隨機(jī)引物法
3．液體閃爍計(jì)數(shù)
4．非放射性探針
（六）DNA芯片技術(shù)
第六章 DNA的連接
一、大腸桿菌DNA連接酶和T4DNA連接酶
二、DNA片段在體外的連接
（一）粘性末端的連接
（二）平齊末端的連接
（三）非互補(bǔ)末端的連接
（四）接頭的使用
1．1inker
2．a(chǎn)daptor
三、影響連接反應(yīng)的因素
四、提高連接反應(yīng)效率的兩項(xiàng)措施
第七章 細(xì)菌轉(zhuǎn)化
一、細(xì)菌轉(zhuǎn)化的原理
二、細(xì)菌轉(zhuǎn)化的方法
（一）簡(jiǎn)便、快速的感受態(tài)制備和轉(zhuǎn)化方法
（二）標(biāo)準(zhǔn)的高效轉(zhuǎn)化法
（三）“超級(jí)感受態(tài)”細(xì)胞的制備和轉(zhuǎn)化
（四）菌落轉(zhuǎn)化法
（五）X1776的轉(zhuǎn)化方法
（六）電擊轉(zhuǎn)化
三、轉(zhuǎn)化的評(píng)估指標(biāo)
（一）轉(zhuǎn)化效率（轉(zhuǎn)化頻率）
（二）感受態(tài)細(xì)胞的比例
第八章 理想克隆的鑒定
一、表現(xiàn)型的鑒定
（一）利用抗生素進(jìn)行篩選
（二）利用顯色進(jìn)行篩選
二、限制性作圖分析
（一）限制性作圖
（二）限制性分析與Southern雜交相結(jié)合
三、菌落和噬菌斑的原位雜交
（一）菌落原位雜交
（二）噬菌斑原位雜交
（三）原位雜交的優(yōu)越性和進(jìn)一步的鑒定
四、用PCR擴(kuò)增目的片段
五、免疫檢測(cè)法
（一）用免疫檢測(cè)法篩選表達(dá)文庫(kù)的過(guò)程
1．篩選噬菌斑構(gòu)成的表達(dá)文庫(kù)
2．篩選菌落構(gòu)成的表達(dá)文庫(kù)
（二）關(guān)于免疫檢測(cè)法的幾個(gè)問(wèn)題
1．多克隆抗體和單克隆抗體
2．多克隆抗體的來(lái)源
3．第一抗體的檢測(cè)
4．第二抗體的來(lái)源
5．對(duì)酶促發(fā)色法和放射化學(xué)法進(jìn)行比較
6．對(duì)堿性磷酸酶與抗體的偶聯(lián)物和辣根過(guò)氧化物酶與抗體的偶聯(lián)物進(jìn)行比較
7．誘導(dǎo)外源蛋白表達(dá)的時(shí)間
六、酵母人工染色體文庫(kù)的篩選
（一）YAC基因組文庫(kù)的保存
（二）YAC基因組文庫(kù)的篩選方法
（三）構(gòu)建、貯存和篩選的分工
（四）篩選YAC文庫(kù)的流程
第九章 克隆基因在大腸桿菌細(xì)胞中的表達(dá)
一、外源基因在大腸桿菌細(xì)胞中表達(dá)的原理和技術(shù)
（一）表達(dá)系統(tǒng)的選擇
1．蛋白質(zhì)的大小
2．蛋白質(zhì)的活性
3．蛋白質(zhì)的需要量
（二）啟動(dòng)子的選擇
1．乳糖操縱子的啟動(dòng)子（1acUV5啟動(dòng)子）
2．色氨酸啟動(dòng)子（trp啟動(dòng)子）
3．乳糖操縱子和色氨酸操縱子的復(fù)合啟動(dòng)子（tac或trc啟動(dòng)子）
4．噬菌體T7啟動(dòng)子
（三）融合蛋白質(zhì)的表達(dá)
1．融合蛋白質(zhì)表達(dá)的特點(diǎn)和載體
……
第十章 cDNA文庫(kù)技術(shù)
第十一章 基因組文庫(kù)的構(gòu)建
第十二章 DNA的序列分析
第十三章 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
第十四章 克隆化DNA的定點(diǎn)誘變
第十五章 圖位克隆法
第十六章 釀酒酵母的遺傳工程
第十七章 植物基因工程
第十八章 哺乳動(dòng)物的基因工程
第十九章 用重組DNA技術(shù)生產(chǎn)藥物